Руководство к практическим занятиям по биохимии. Учебное пособие для студентов специальностей «Ветеринария» и «Ветеринарно-санитарная экспертиза»

Татьяна Александровна Лобаева, 2022

Учебное пособие "Руководство к практическим занятиям по биохимии" предназначено для студентов вузов, обучающихся по специальностям "Ветеринария" и "Ветеринарно-санитарная экспертиза" и содержит краткий теоретический материал курса биохимии, методики лабораторных работ, а также задания для организации самостоятельной работы студентов. При описании методик проведения лабораторных работ использованы удобные таблицы, позволяющие легко оформить полученный экспериментальный результат. В конце каждого раздела имеются контрольные вопросы, целью которых является выработка у будущего специалиста самостоятельного осмысления связи между полученными данными эксперимента и установившимися теоретическими положениями.Рецензенты:Смирнова Ксения Валерьевна – к.б.н., зав. лабораторией вирусного канцерогенеза НИИ канцерогенеза ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава РоссииШатова Ольга Петровна – к.м.н., доцент кафедры биохимии и молекулярной биологии РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Правила пользования приборами для биохимических исследований

1. ФОТОМЕТР

В биохимических исследованиях фотометр используется для определения концентрации вещества в растворе по оптической плотности или коэффициенту пропускания раствора. Действие фотометра основано на том, что многие химические соединения поглощают свет в определенной спектральной области. При этом в определенных пределах концентраций величина оптической плотности раствора (то есть интенсивность поглощения света) прямо зависит от концентрации вещества в растворе. Оптическая плотность раствора определяется по формуле:

D = E l • c

D — оптическая плотность

E — коэффициент молярной экстинкции

l — толщина кюветы

c — концентрация раствора

E — коэффициент молярной экстинкции (или молярный коэффициент поглощения) — это оптическая плотность раствора концентрацией 1 моль/л при длине светового пути (толщине кюветы) равной 1 см. Величина постоянная для каждого вещества при данной длине волны.

Фотометр КФК-3–01. Общий вид

1 — ручка изменения длины волны излучения

2 — световое табло

3 — панель управления

4 — крышка кюветного отделения

5 — ручка перемещения кювет

6 — тумблер «Сеть»

Показания светового табло

7 — выбор режима измерения оптической плотности

8 — градуировка

9 — результаты измерения оптической плотности холостой пробы (воды)

10 — результаты измерения оптической плотности исследуемого раствора

11 — кювета (внешний вид)

Правила работы с прибором

1. Включите прибор в сеть. При закрытой крышке кюветного отделения включите тумблер «Сеть» (6), расположенный на боковой поверхности прибора. Тумблер загорится красным светом. В нижней половине светового табло (2) сначала появится надпись «Прогрев прибора», затем надпись «Прогрев лампы». По истечении 10 мин фотометр выдаст звуковой сигнал и на табло появится надпись «Готов к работе. Введите режим».

2. Последовательным нажатием клавиши D на панели управления (3) выберите нужный режим измерения (А — оптическая плотность), который высветится в нижней части светового табло (7).

3. Установите нужную длину волны круглой ручкой (1), находящейся слева на передней панели прибора (значение длины волны высвечивается в верхней строке светового табло). Установку длины волны необходимо выполнять подводкой со стороны коротких волн к более длинным. Если при установке значение длины волны превысило требуемое, необходимо вновь вернуться на 20–30 нм к более коротким волнам и повторно аккуратно подвести к требуемому значению длины волны.

4. Промойте водой кюветы (11) и промокните их внутреннюю поверхность чистой фильтровальной бумагой. Снаружи также протрите их фильтровальной бумагой. Откройте крышку кюветного отделения (4). Налейте в кювету воду и установите ее строго вертикально в дальнее гнездо кюветодержателя. Исследуемый раствор налейте во вторую кювету и установите ее в ближнее гнездо кюветодержателя. При установке кювет нельзя касаться их рабочих поверхностей. Наличие загрязнений на рабочих поверхностях может привести к неверным результатам.

5. Ручку перемещения кювет (5) установите в крайнее левое положение.

6. Закройте крышку кюветного отделения.

7. Нажмите клавишу «#» на панели управления. В нижней части светового табло на верхней строке появится надпись «Градуировка» (8), а через 3–5 секунд надпись «Измерение». На нижней строке появится измеренное значение оптической плотности холостой пробы (воды), например «А = 0,000» (9). Оно должно составлять 0,000±0,002. Если значение А имеет большее отклонение от нуля, необходимо повторно провести градуировку (нажать «#»).

8. Ручку перемещения кювет установите вправо до упора. Через несколько секунд на нижней строке появится значение оптической плотности исследуемого раствора, например «А = 0,230» (10). Запишите полученное значение оптической плотности в рабочую тетрадь.

9. После завершения работы выключите прибор нажатием тумблера «Сеть» и отключите прибор из сети.

2. ТЕРМОБЛОК

Термоблок предназначен для нагревания проб в пробирках и виалах в заданном температурном режиме.

ВАЖНО: прибор работает без заполнения ячеек водой. Заполнение водой опасно для жизни!

Термоблок ПЭ-4020. Общий вид.

1 — тумблер «Сеть»

2 — кнопка «Установка/работа»

3 — кнопки установки температуры

4 — ячейки для пробирок

5 — световое табло

6 — световой индикатор работы

Правила работы с прибором

1. Включите тумблер «Сеть» (1). Тумблер загорится красным светом.

2. Используя кнопки установки температуры (3) выставите на световом табло (5) требуемый температурный режим.

3. Нажмите кнопку «Установка/работа» (2). После этого начнется нагрев ячеек. Световой индикатор работы (6) станет мигать красно-зеленым цветом, а на световом табло высветится текущая температура в ячейках, которая будет постепенно увеличиваться, пока не достигнет заданного значения. После этого термоблок будет работать в режиме поддержания заданной температуры.

4. После достижения заданной температуры установите пробирки с исследуемыми растворами в ячейки термоблока (4) и оставьте их в течение необходимого срока инкубации.

5. После завершения работы выключите прибор нажатием тумблера «Сеть» и отключите прибор из сети.